Las vesículas extracelulares (EV) son muy prometedoras para el uso diagnóstico y terapéutico. Sin embargo, su investigación se ha visto dificultada por la ausencia de un método de aislamiento riguroso y de alto rendimiento que facilite la recogida y comparación simultánea de EV de múltiples fuentes. Para superar este desafío, System Biosciences (SBI) ha desarrollado EV SmartSEC™ HT para suero y plasma: es el primer kit en el mercado que permite el aislamiento de EV en un formato de placa de 96 pocillos.

Este nuevo método de SBI para purificar exosomas es un sistema de alto rendimiento y libre de polímero en el que se combina la exclusión por tamaño mediante cromatografía con un sistema que atrapa los contaminantes. Permite la purificación de hasta 96 muestras de manera rápida y fácil: ¡en menos de una hora!

¿Cómo funciona? 

El kit suministrado por SBI incluye una placa de 96 en la que está la resina alicuoteada. En cada pocillo se añaden 250-500 µl de muestra y, después, se incuba y centrifuga para eluir la primera fracción. A continuación, se agrega el buffer de aislamiento, se vuelve a centrifugar y se recoge la segunda fracción. Dependiendo del volumen de muestra cargada, la mayoría de los EV se recolectarán en la primera o segunda elución (se recomienda recolectar las dos fracciones por separado para el análisis y a posteriori decidir si hacer un pool según sus necesidades).

La purificación puede hacerse manual o automática (ANSI/SBS estándar).

El kit es válido para la extracción de EVs de hasta 96 muestras en paralelo. Sin embargo, son placas semi escindibles, por lo que es posible reducir el número a 24 o 48 muestras simplemente con recortar los pocitos no necesarios.

Ofrece las siguientes ventajas:

1. Rápido. Hasta 96 muestras en menos de una hora.
2. Fácil de usar. Las muestras de suero o plasma (no necesita tratamiento) se añaden directamente en la placa.
3. Versátil. Compatible con casi todas las técnicas de estudio de los exosomas.
4. Alta pureza y rendimiento.

Pureza y rendimientos alcanzables con SmartSEC HT

SmartSEC™ HT ofrece altos rendimientos de EV con bajas cantidades de proteína de arrastre indeseable. Los EV se prepararon a partir de 500 µL de suero (A) o plasma (B) usando los métodos indicados. Para el análisis por Western blot, se cargó 1 µg de proteína equivalente de la primera fracción en cada línea. Los resultados demuestran que SmartSEC™ HT funciona mejor que la ultracentrifugación y que la columna “q” SEC de la competencia.

Aquí, los EV se prepararon a partir de 250 µL y 500 µL de suero y plasma usando los métodos indicados y el rendimiento determinado utilizando (A) un ensayo de proteína Qubit y (B) análisis de seguimiento de nanopartículas fluorescentes (fNTA). La figura superior proporciona un resumen tabular de los valores de datos trazados. Por ambos métodos de rendimiento EV, SmartSEC HT supera a los otros métodos.

Puedes consultar más información sobre este nuevo sistema en los siguientes links:

• Manual de usuario: SmartSEC HT EV Isolation System for Serum & Plasma.
• Ficha técnica: SmartSEC HT EV Isolation System for Serum & Plasma.
• Catálogo: Exosome Research Products and Services.

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REFERENCIAS

SmartSEC HT EV Isolation System for Serum & Plasma. Más información aquí.

Fuente: bioNova científica / SBI / Cientisol

Crédito imágenes: SBI System Biosciences.